穩(wěn)定細(xì)胞株是指具有長時間傳代穩(wěn)定轉(zhuǎn)基因表達(dá)的細(xì)胞系，其原理主要包括兩個方面：轉(zhuǎn)染外源DNA和篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
穩(wěn)定細(xì)胞株的建立需要將外源DNA轉(zhuǎn)染到目標(biāo)細(xì)胞中。目前常用的轉(zhuǎn)染方法有瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩種。瞬時轉(zhuǎn)染主要通過電轉(zhuǎn)、化學(xué)轉(zhuǎn)染或病毒載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方式將外源DNA引入細(xì)胞中，但由于外源DNA在細(xì)胞內(nèi)并不穩(wěn)定，很快會被降解掉，因此瞬時轉(zhuǎn)染無法實現(xiàn)長時間穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因表達(dá)。相比之下，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染則通過將外源DNA整合到細(xì)胞染色體中(如利用病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染)，或者利用ssiRNA介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染來實現(xiàn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)基因表達(dá)。這樣轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在傳代過程中能夠保持外源DNA的整合狀態(tài)，從而實現(xiàn)長時間穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因表達(dá)。
其次，篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞是穩(wěn)定細(xì)胞株建立的另一個重要環(huán)節(jié)。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞一般會攜帶有外源基因和篩選標(biāo)記基因(如抗生素抗性基因)的表達(dá)載體，通過添加相應(yīng)的篩選物質(zhì)(如抗生素)來選擇和篩選細(xì)胞中整合了外源DNA的細(xì)胞。只有在經(jīng)過篩選后的細(xì)胞中，外源DNA與篩選標(biāo)記基因才能穩(wěn)定遺傳給下一代細(xì)胞，并產(chǎn)生穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)基因。此外，還可以利用構(gòu)建熒光蛋白標(biāo)記基因(如綠色熒光蛋白)來實現(xiàn)綠色熒光蛋白的特異性表達(dá)，從而篩選出綠色熒光蛋白陽性的細(xì)胞。
穩(wěn)定細(xì)胞株的使用方法：
1.通過轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，通常是采用質(zhì)粒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法，將目標(biāo)基因或蛋白的表達(dá)載體導(dǎo)入細(xì)胞中。同時加入適當(dāng)?shù)暮Y選或選擇抗生素，使得只有轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞能夠生存下來。經(jīng)過一段時間的培養(yǎng)和篩選，從中篩選出穩(wěn)定表達(dá)目標(biāo)基因或蛋白的細(xì)胞株。
2.主要應(yīng)用之一是用于穩(wěn)定表達(dá)外源基因的研究。研究人員可以構(gòu)建和表達(dá)自己感興趣的基因，然后將其導(dǎo)入目標(biāo)細(xì)胞株中，以研究該基因的功能、調(diào)控機制等。利用可以實現(xiàn)長時間連續(xù)表達(dá)目標(biāo)基因，確保實驗結(jié)果的可靠性。
3.還可用于蛋白的表達(dá)和功能研究。研究人員可以將感興趣的蛋白導(dǎo)入中，使其在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)。借助可以定量表達(dá)特定蛋白，用于酶活測定、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、細(xì)胞分裂、細(xì)胞凋亡等功能研究。
4.也可用于藥物篩選和毒性測試。研究人員可以利用，如癌細(xì)胞株，檢測不同藥物或化合物的生物活性、毒性等。通過與對照組進(jìn)行比較，可以評估藥物的療效或毒性，并且可以為藥物開發(fā)和篩選提供參考。
